Kontaminasi kultur sel dapat dengan mudah menjadi masalah yang paling umum di laboratorium kultur sel, terkadang menyebabkan konsekuensi yang sangat serius.Kontaminan kultur sel dapat dibagi menjadi dua kategori, kontaminan kimia seperti medium, serum dan pengotor air, endotoksin, plasticizer dan deterjen, dan kontaminan biologis seperti bakteri, jamur, ragi, virus, infeksi silang mikoplasma.Terkontaminasi oleh garis sel lain.Meskipun tidak mungkin untuk sepenuhnya menghilangkan kontaminasi, frekuensi dan tingkat keparahannya dapat dikurangi dengan memahami sumbernya secara menyeluruh dan mengikuti teknik aseptik yang baik.
1. Bagian ini menguraikan jenis-jenis utama pencemaran biologis:
Kontaminasi bakteri
Kontaminasi jamur dan virus
kontaminasi mikoplasma
Kontaminasi ragi
1.1Kontaminasi bakteri
Bakteri adalah kelompok besar mikroorganisme bersel tunggal yang ada di mana-mana.Mereka biasanya hanya berdiameter beberapa mikron dan bisa datang dalam berbagai bentuk, dari bola hingga batang dan spiral.Karena keberadaannya di mana-mana, ukurannya, dan tingkat pertumbuhannya yang cepat, bakteri, bersama dengan ragi dan kapang, merupakan kontaminan biologis yang paling umum dalam kultur sel.
1.1.1 Deteksi Kontaminasi Bakteri
Kontaminasi bakteri mudah dideteksi dengan inspeksi visual kultur dalam beberapa hari setelah terinfeksi;
Kultur yang terinfeksi biasanya tampak keruh (yaitu, keruh), terkadang dengan lapisan tipis di permukaan.
Penurunan pH media kultur secara tiba-tiba juga sering ditemui.
Di bawah mikroskop daya rendah, bakteri tampak kecil, butiran bergerak di antara sel, dan pengamatan di bawah mikroskop daya tinggi dapat menyelesaikan bentuk bakteri individu.
1.2 Kontaminasi Jamur & Virus
1.2.1 Kontaminasi Jamur
Jamur adalah mikroorganisme eukariotik dari kerajaan jamur yang tumbuh dalam bentuk filamen multiseluler yang disebut hifa.Jaringan ikat filamen multiseluler ini mengandung inti yang identik secara genetik yang disebut koloni atau miselium.
Mirip dengan kontaminasi ragi, pH biakan tetap stabil selama fase awal kontaminasi dan kemudian meningkat dengan cepat saat biakan terinfeksi lebih parah dan menjadi keruh.Di bawah mikroskop, miselium biasanya berserabut, kadang-kadang sebagai kumpulan spora yang padat.Spora dari banyak jamur dapat bertahan hidup di lingkungan yang sangat keras dan tidak ramah selama fase tidak aktifnya dan diaktifkan hanya ketika kondisi pertumbuhan yang tepat ditemui.
1.2.2 Kontaminasi Virus
Virus adalah agen menular mikroskopis yang mengambil alih mesin sel inang untuk reproduksi.Ukurannya yang sangat kecil membuatnya sulit dideteksi dalam kultur dan untuk dihilangkan dari reagen yang digunakan di laboratorium kultur sel.Karena sebagian besar virus memiliki persyaratan yang sangat ketat untuk inangnya, mereka biasanya tidak mempengaruhi biakan sel dari spesies selain inang.
Namun, penggunaan kultur sel yang terinfeksi virus dapat menimbulkan risiko serius bagi kesehatan pegawai laboratorium, terutama jika sel manusia atau primata ditumbuhkan di laboratorium.
Infeksi virus dalam kultur sel dapat dideteksi dengan mikroskop elektron, imunostaining dengan sekumpulan antibodi, ELISA, atau PCR dengan primer virus yang sesuai.
1.3 Kontaminasi mikoplasma
Mycoplasma adalah bakteri sederhana tanpa dinding sel, dan dianggap sebagai organisme terkecil yang dapat mereplikasi diri.Karena ukurannya yang sangat kecil (biasanya kurang dari 1 mikron), mikoplasma sulit dideteksi hingga mencapai kepadatan yang sangat tinggi dan menyebabkan kultur sel memburuk;Sampai saat itu, biasanya tidak ada tanda infeksi yang jelas.
1.3.1 Deteksi kontaminasi mikoplasma
Beberapa mikoplasma yang tumbuh lambat dapat bertahan dalam biakan tanpa menyebabkan kematian sel, tetapi mengubah perilaku dan metabolisme sel inang dalam biakan.
Infeksi mikoplasma kronis dapat ditandai dengan penurunan laju proliferasi sel, penurunan densitas saturasi, dan aglutinasi dalam kultur suspensi.
Namun, satu-satunya cara yang dapat diandalkan untuk mendeteksi kontaminasi mikoplasma adalah dengan menguji biakan secara teratur menggunakan pewarnaan fluoresen (misalnya, Hoechst 33258), ELISA, PCR, imunostaining, autoradiografi, atau pengujian mikroba.
1.4 Kontaminasi ragi
Ragi adalah eukariota bersel tunggal dari kerajaan jamur, ukurannya mulai dari beberapa mikron (biasanya) hingga 40 mikron (jarang).
1.4.1Deteksi kontaminasi ragi
Seperti kontaminasi bakteri, biakan yang terkontaminasi ragi dapat menjadi keruh, terutama jika kontaminasi sudah dalam stadium lanjut.PH kultur yang terkontaminasi ragi berubah sangat sedikit sampai kontaminasi menjadi lebih parah, pada tahap mana pH biasanya meningkat.Di bawah mikroskop, ragi muncul sebagai partikel ovoid atau bola individu dan dapat menghasilkan partikel yang lebih kecil.
2. Infeksi silang
Meskipun tidak umum seperti kontaminasi mikroba, kontaminasi silang yang luas dari banyak lini sel dengan HeLa dan lini sel lain yang tumbuh cepat merupakan masalah yang jelas dengan konsekuensi serius.Dapatkan garis sel dari bank sel terkemuka, periksa karakteristik garis sel secara teratur, dan gunakan teknik aseptik yang baik.Praktik-praktik ini akan membantu Anda menghindari kontaminasi silang.Sidik jari DNA, karyotyping dan isotyping dapat memastikan apakah ada kontaminasi silang dalam kultur sel Anda.
Meskipun tidak umum seperti kontaminasi mikroba, kontaminasi silang yang luas dari banyak lini sel dengan HeLa dan lini sel lain yang tumbuh cepat merupakan masalah yang jelas dengan konsekuensi serius.Dapatkan garis sel dari bank sel terkemuka, periksa karakteristik garis sel secara teratur, dan gunakan teknik aseptik yang baik.Praktik-praktik ini akan membantu Anda menghindari kontaminasi silang.Sidik jari DNA, karyotyping dan isotyping dapat memastikan apakah ada kontaminasi silang dalam kultur sel Anda.
Waktu posting: Feb-01-2023